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    Caracterização fenotípica e molecular de Acinetobacter spp. resistentes aos carbapenêmicos provenientes de amostras clínicas hospitalares de Mossoró-RN
    (2023-10-11) Amaral, Marcileide Almeida; Aires, Caio Augusto Martins; Aires, Caio Augusto Martins; Feijó, Francisco Marlon Carneiro; Freitas, Kalidyjamayra Oliveira Reis de
    Acinetobacter spp. abrange patógenos oportunistas considerados de grande interesse do ponto de vista clínico. Acinetobacter baumannii, principal representante do gênero, é frequentemente descrita como causadora de infecções relacionadas à assistência à saúde. Por possuírem resistência antimicrobiana intrínseca a diversas drogas e propensão a adquirir mecanismos exógenos de resistência, esses microrganismos comprometem a qualidade dos sistemas de saúde a nível global. Tendo em vista a necessidade de vigilância sobre esse patógeno para a elaboração de medidas de contenção de surtos hospitalares, o objetivo deste estudo foi determinar o perfil fenotípico e genotípico de resistência em isolados clínicos de Acinetobacter spp. de um hospital de Mossoró-RN. Um total de 48 isolados identificados como Acinetobacter spp. e resistentes a pelo menos um carbapenêmico, bem como seus respectivos dados, foram coletados entre 2019 e 2023. Para confirmar a identificação dos isolados foi realizada a detecção do gene blaOXA-51, intrínseco de A. baumanii. O perfil de resistência foi determinado por meio do Teste de disco-difusão em ágar (Kirby-Bauer). Os genes de carbapenemases foram identificados através da técnica de PCR. Foi possível observar que a maioria dos isolados foi oriunda de aspirado traqueal e fragmento de lesão. Além das altas taxas de resistência para os carbapenêmicos e cefalosporinas, foram detectadas altas taxas de resistência acima de 70% para todas as outras classes testadas. O gene de resistência mais prevalente foi o blaOXA-23. Também foram detectados os genes blaKPC, blaVIM, blaIMP, blaNDM e blaOXA-143. Em alguns isolados foi detectado mais de um gene codificante de carbapenemases. Portanto, esses dados reafirmam que Acinetobacter spp. é um gênero bacteriano disseminado em ambientes hospitalares que apresenta alta capacidade de obtenção de mecanismos de resistência a diversos antimicrobianos, tornando cada vez mais escassas as alternativas terapêuticas para o tratamento. Por isso, medidas de vigilância e contenção desses patógenos são necessárias.
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    Produção de antígenos recombinantes das cepas de Sars-Cov e Sars-Cov-2 em sistema bacteriano
    (2023-10-11) Menezes, Santiago Oliveira; Batista, Aline Lidiane; Batista, Aline Lidiane; Lima, Emanuel Kennedy Feitosa; Sakamoto, Sidnei Miyoshi
    O SARS-CoV-2, agente causador da COVID-19, teve um impacto global significativo devido à sua rápida disseminação e alta transmissibilidade, levando a crises nos sistemas de saúde em várias regiões. Inicialmente, houve foco na análise das proteínas Spike (S), com ênfase nos domínios de ligação ao receptor (RBD) da subunidade S1. Posteriormente, a proteína N, devido a seu potencial antigênico, alta transmissibilidade e conservação de seus nucleotídeos entre os coronavírus, passou a ser estudada visando aplicações em diagnóstico e vacinas. Nesse cenário, o Laboratório de Análises Clínicas do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS) da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA) conduziu estudos para produzir antígenos virais a partir das proteínas do Nucleocapsídeo (N) dos coronavírus SARS-CoV e SARS-CoV-2. Isso envolveu o sistema de expressão em Escherichia coli baseado no operon lac, permitindo a obtenção de proteínas com alto rendimento na produção, essenciais para análises estruturais e de estabilidade, incluindo transformação bacteriana, expressão de proteínas recombinantes e análises por SDS-PAGE. Os resultados demonstraram êxito na expressão dessas proteínas, com a presença de bandas putativas ~40Kda nos géis. O papel da região rica em SR na proteína N da SARS- COV-2, envolvendo oligomerização e compactação do RNA viral, é fundamental para a replicação do genoma viral, tornando-a um alvo promissor para terapias antivirais que visam interromper a replicação em indivíduos infectados por SARS. Adiante, em uma próxima fase poderá ser realizado a purificação das proteínas através da cromatografia, seguida por testes imunológicos, como ensaios de ELISA, para avaliar a reatividade cruzada. Essas análises são fundamentais para aprimorar estratégias terapêuticas e diagnósticas. Ressalta-se a importância deste estudo, especialmente diante dos casos contínuos em 2023, evidenciando a urgência de pesquisas para melhorar as medidas de combate à pandemia. A persistência de óbitos em 2023, mesmo após campanhas de vacinação, reforça a necessidade contínua de investigar a estrutura viral, produzir proteínas aplicáveis em diagnósticos eficazes e acelerar o rastreamento e as medidas de contenção. Especialmente em cenários nos quais testes altamente sensíveis são essenciais para a proteção da saúde pública.
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    Avaliação das técnicas de criopreservação da pele e cartilagem auricular apical de Galea spixii (Wagler, 1831)
    (2023-09-23) Olindo, Samara Lima; Pereira, Alexsandra Fernandes; Pereira, Alexsandra Fernandes; Oliveira, Radan Elvis Matias de; Aquino, Leonardo Vitorino Costa de
    A ordem Rodentia é constituída por uma variedade de espécies de pequeno a grande porte, e destes, o Galea spixii é um representante de importante papel ecológico, econômico e científico. Buscando contribuir para a conservação e conhecimento da espécie, bancos de tecidos somáticos representam um passo significativo para o uso destas amostras como estratégias de conservação, sendo o estabelecimento adequado dos protocolos de criopreservação tecidual a primeira etapa da formação destes bancos. Portanto, o objetivo foi comparar duas técnicas de criopreservação tecidual (vitrificação em superfície sólida vs. congelação lenta) na conservação de tecidos somáticos de G. spixii. Para tanto, tecidos somáticos derivados de biópsias do pavilhão auricular apical de quatro G. spixii machos e adultos pertencentes ao Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA) foram coletados, e transportados ao laboratório em meio essencial mínimo modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB) e 2% de solução de antibióticos­antimicótico. No laboratório, as amostras foram tricotomizadas, fragmentadas em 9,0 mm3 e distribuídas, aleatoriamente, entre os grupos: i) grupo controle (não criopreservado); ii) vitrificação em superfície sólida (VSS) e iii) congelação lenta (CL). Para a CL, DMEM em associação a 10% de dimetilsulfóxido (DMSO), 10% de SFB e sacarose (SAC; 0,2 M) foram empregados como solução de criopreservação, enquanto para a VSS, 3,0 M de DMSO em associação a 3,0 M de etilenoglicol (EG) e 0,25 M de SAC foram empregados. Tecidos somáticos foram avaliados quanto às suas características morfológicas, morfométricas e proliferativas por técnicas histológicas. Além disso, fragmentos foram submetidos ao cultivo primário, onde foi observada a viabilidade, atividade proliferativa e metabólica, e níveis apoptóticos das células recuperadas. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão, considerando um animal/uma repetição. Os dados foram analisados pelo software GraphPad, considerando P < 0,05. Para a análise da espessura da pele, apenas a córnea sofreu alteração após a criopreservação por VSS (0,99 ± 0,31 μm), quando comparada ao controle (0,81 ± 0,16 μm). Já na epiderme, derme e pele total, não foi verificado diferença entre os grupos avaliados. Em relação à quantificação celular, a VSS (77 ± 17,8) se mostrou similar ao controle (81 ± 18,9) quanto ao número de células da epiderme, enquanto a CL (22 ± 3,93) apresentou um maior número de halos perinucleares quando comparado ao controle (19 ± 3,97). Na derme, o número de fibroblastos manteve­se similar entre os grupos experimentais, apesar da técnica por CL ter apresentado um menor percentual de fibras colágenas. Após a avaliação da cartilagem, foi observado que a VSS continha um maior número de condrócitos degenerados. Contudo, a CL apresentou um menor número de condrócitos normais e lacunas preenchidas. Ainda, a técnica por CL (1,65 ± 0,47) revelou uma maior área de AgNOR/célula quando comparado ao controle (1,07 ± 0,14) e VSS (1,30 ± 0,31). Após o cultivo in vitro dos tecidos somáticos, não foi observada diferença após a análise da viabilidade celular e atividade metabólica, demonstrando uma eficiência das técnicas empregadas. Embora isso tenha ocorrido, as células pertencentes aos tecidos da VSS (34,1 h ± 2,9) necessitaram de um maior tempo para duplicar­se quando comparado ao controle (19,6 h ± 4,3) e CL (24,4 h ± 2,9). Quanto aos níveis apoptóticos, foi observado que a CL continha um maior número de células em apoptose tardia (22,3 ± 4,2) e necróticas (5,6 ± 2,2) quando comparado a técnica por VSS (5,8 ± 1,6; 0,4 ± 0,3, respectivamente). Em síntese, os protocolos de criopreservação foram eficientemente empregados em pele e cartilagem auricular de G. spixii. Contudo, considerando a manutenção da arquitetura estrutural do tecido após a avaliação por histologia e cultivo in vitro, a técnica por VSS se destaca em virtude da sua fácil execução, baixo custo e por oferecer a possibilidade de aplicação em campo. Portanto, com essas informações, foi possível compreender algumas das etapas envolvidas para a formação de bancos somáticos para o G. spixii.
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    Avaliação da idade e do sexo de peixe-boi-marinho, Trichechus manatus manatus (Linnaeus, 1758) sobre a descrição morfológica e cultivo in vitro da derme
    (2023-10-02) Moura, Yasmin Beatriz França; Aires, Caio Augusto Martins; Aires, Caio Augusto Martins; Feijó, Francisco Marlon Carneiro; Freitas, Kalidyjamayra Oliveira Reis de
    O peixe-boi-marinho é um herbívoro aquático que pertence a ordem dos sirênios, e que se encontra vulnerável à extinção. Em virtude disso, estratégias de conservação por meio da utilização da derme têm sido observadas, uma vez que, essa fonte valiosa possibilita sua aplicação em biotecnologias mais complexas. Contudo, ainda é necessário o conhecimento acerca dos padrões morfológicos e celulares desta região, especialmente no que se refere aos fatores que podem influenciar suas características, como a idade e sexo do animal. Considerando essa abordagem, o objetivo foi avaliar a influência da idade e sexo sobre os padrões morfológicos e cultivo in vitro da derme de T. m. manatus. Para tanto, fragmentos de derme abdominal de seis indivíduos (três machos vs. três fêmeas; dois até 3 anos e 5 meses vs. dois entre 3 anos e 6 meses até 16 anos vs. dois até 23 anos e 6 meses) foram obtidos, e transportados ao laboratório. No laboratório, a derme foi fragmentada (6,0 mm3), e as amostras foram distribuídas para descrições histológicas e cultivo in vitro. Para a descrição histológica, fragmentos corados com hematoxilina-eosina, tricrômico de Gomori e nitrato de prata foram usados para avaliações morfológicas, morfométricas e potencial proliferativo das células, respectivamente. Já para o cultivo in vitro, células recuperadas foram avaliadas quanto à morfologia, viabilidade por azul de tripan, atividade proliferativa pela determinação do tempo de duplicação da população, metabolismo pelo ensaio de 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-di-fenil brometo de tetrazolina, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e níveis apoptóticos por marcadores fluorescentes. Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão, usando o software Graphpad (P < 0,05). Dentre os principais resultados, <3,5 anos e de 3,6-16 anos (72 ± 8) apresentaram uma maior quantidade de células somáticas (80 ± 9) quando comparado aos de 23,6 anos (39 ± 7). Indivíduos de 3,6-16 anos demonstraram menor quantidade de colágeno (82% ± 2), maior ΔΨm (1,1 ± 0,7) e EROs (1,3 ± 0,8), em relação as outras idades. Para os sexos, o quantitativo de células somáticas em fêmeas (49 ± 10) foi menor que em machos (78 ± 8). Animais do sexo masculino demonstraram maior quantidade de unidades arbitrárias de ΔΨm (1,0 ± 0,5), em comparação com as fêmeas (0,8 ± 0,3). As demais avaliações não demonstraram diferenças entre idades e sexos. Apesar de as idades e os sexos influenciarem no quantitativo de células somáticas e no potencial da membrana mitocondrial, ambos são vantajosos para aplicação científica, colaborando com a conservação de T. m. manatus.
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    Padronização do teste ELISA indireto utilizando a proteína recombinante cp09720 de Corynebacterium pseudotuberculosis para o diagnóstico de Linfadenite Caseosa em caprinos
    (2023-10-11) Macedo, Gabriel Freitas de; Quintans, Isadora Louise Alves da Costa Ribeiro; Quintans, Isadora Louise Alves da Costa Ribeiro; Bezerra, Francisco Silvestre Brilhante; Vasconcelos, Bárbara Monique de Freitas
    A caprinocultura registrou 12 milhões de cabeças no Brasil em 2023 e desempenha um papel importante para economia do país, fornecendo produtos diversos, porém enfrentam patogenias, como a linfadenite caseosa (LC) causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis (CP), que compromete cerca de 6,09% da produção. O método sorológico ELISA indireto é utilizado na detecção de LC, mas obter especificidade e sensibilidade confiáveis são um desafio. O uso de proteínas recombinantes no ensaio de ELISA indireto vem sendo empregado com o propósito de aprimorar a sensibilidade e especificidade dos testes diagnósticos, sendo padronizadas diferentes proteínas. Portanto, este trabalho buscou a padronização e sensibilização do método ELISA indireto utilizando a proteína recombinante CP09720 de CP. A expressão heteróloga utilizou o plasmídeo recombinante pAE/cp01850. Sua purificação foi realizada com cromatografia de afinidade ao níquel e quantificação com método BCA (ácido bincônico). A identidade da proteína foi comprovada utilizando a técnica de SDS-PAGE. A padronização do teste ELISA indireto com a proteína rCP09720 foi realizada com o método Checkerboard titration. Foram utilizados um total de 80 amostras, 40 positivas e 40 negativas para LC. Foi obtida uma quantidade correspondente a 6,9 mg/L da esterase recombinante de tamanho correspondente a 35 kDa. A curva ROC resultou em ponto de corte de 0,06550, acurácia de 0,752, sensibilidade de 62,5% e especificidade de 70%. Estes resultados sugerem, que estudos adicionais devem ser realizados para aumentar o potencial da esterase CP09720 na detecção de Corynebacterium pseudotuberculosis no teste ELISA indireto para detecção de LC em caprinos.
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    Caracterização fenotípica e molecular de Acinetobacter spp. resistentes aos carbapenêmicos provenientes de amostras clínicas hospitalares de Mossoró-RN
    (2023-10-11) Amaral, Marcileide Almeida; Aires, Caio Augusto Martins; Aires, Caio Augusto Martins; Feijó, Francisco Marlon Carneiro; Freitas, Kalidyjamayra Oliveira Reis de
    Acinetobacter spp. abrange patógenos oportunistas considerados de grande interesse do ponto de vista clínico. Acinetobacter baumannii, principal representante do gênero, é frequentemente descrita como causadora de infecções relacionadas à assistência à saúde. Por possuírem resistência antimicrobiana intrínseca a diversas drogas e propensão a adquirir mecanismos exógenos de resistência, esses microrganismos comprometem a qualidade dos sistemas de saúde a nível global. Tendo em vista a necessidade de vigilância sobre esse patógeno para a elaboração de medidas de contenção de surtos hospitalares, o objetivo deste estudo foi determinar o perfil fenotípico e genotípico de resistência em isolados clínicos de Acinetobacter spp. de um hospital de Mossoró-RN. Um total de 48 isolados identificados como Acinetobacter spp. e resistentes a pelo menos um carbapenêmico, bem como seus respectivos dados, foram coletados entre 2019 e 2023. Para confirmar a identificação dos isolados foi realizada a detecção do gene blaOXA-51, intrínseco de A. baumanii. O perfil de resistência foi determinado por meio do Teste de disco-difusão em ágar (Kirby-Bauer). Os genes de carbapenemases foram identificados através da técnica de PCR. Foi possível observar que a maioria dos isolados foi oriunda de aspirado traqueal e fragmento de lesão. Além das altas taxas de resistência para os carbapenêmicos e cefalosporinas, foram detectadas altas taxas de resistência acima de 70% para todas as outras classes testadas. O gene de resistência mais prevalente foi o blaOXA-23. Também foram detectados os genes blaKPC, blaVIM, blaIMP, blaNDM e blaOXA-143. Em alguns isolados foi detectado mais de um gene codificante de carbapenemases. Portanto, esses dados reafirmam que Acinetobacter spp. é um gênero bacteriano disseminado em ambientes hospitalares que apresenta alta capacidade de obtenção de mecanismos de resistência a diversos antimicrobianos, tornando cada vez mais escassas as alternativas terapêuticas para o tratamento. Por isso, medidas de vigilância e contenção desses patógenos são necessárias.