Mestrado em Ciência Animal

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    Avaliação das condições de cultivo e criopreservação sobre o estabelecimento de linhagens fibroblásticas de onças-pintadas, Panthera onca (LINNAEUS, 1758)
    (2020-04-29) Silva, Maria Bárbara; Pereira, Alexsandra Fernandes; Batista, Ana Liza Paz Souza; Silva, Herlon Victor Rodrigues
    O quantitativo populacional cada vez mais reduzido de onças-pintadas, associado à sua importância ecológica, tem resultado no desenvolvimento de estratégias que promovam a sua conservação. Nesse sentido, células somáticas derivadas da pele destes animais podem ser empregadas para essa finalidade, seja na produção de embriões clones, na obtenção de células induzidas à pluripotência e nos estudos genéticos da espécie. Para tanto, o estabelecimento adequado destas amostras é etapa inicial para essas aplicações. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os danos gerados pelas condições de cultivo in vitro e criopreservação sobre o estabelecimento de cinco linhagens fibroblásticas derivadas de onças-pintadas adultas. Assim, fragmentos da pele da região auricular apical de uma fêmea e quatro machos foram cultivados in vitro para a obtenção das células somáticas. Inicialmente, para a identificação do tipo celular, células foram confirmadas como fibroblastos após análise morfológica e de imunofluorescência, e as cinco linhagens (um animal/uma linhagem) foram submetidas a dois experimentos. No primeiro experimento, células foram avaliadas em diferentes passagens do cultivo (primeira, terceira décima) para viabilidade, metabolismo e atividade proliferativa. No segundo experimento, células criopreservadas foram avaliadas quanto a viabilidade, metabolismo, atividade proliferativa, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e apoptose após descongelação em uma, três e dez passagens de cultivo. Células não criopreservadas foram utilizadas como controle. O cultivo in vitro após a primeira (26,1 h ± 4,9), terceira (22,9 h ± 1,6) e décima passagem (22,8 h ± 3,7) e criopreservação (30,0 h ± 1,4) não afetaram a atividade proliferativa. Além disso, nenhuma diferença foi observada para a viabilidade após a primeira (98,9% ± 0,8), terceira (92,5% ± 6,2), décima (95,7% ± 1,4) passagem e criopreservação (73,2% ± 9,8). Contudo, células cultivadas até a décima passagem (49,0% ± 3,3) e criopreservadas (32,7% ± 2,8) reduziram seu metabolismo. Adicionalmente, células criopreservadas mostraram em unidades de fluorescência arbitrárias altos níveis de EROs (1,4 ± 0,1) e ΔΨm alterado (0,9 ± 0,0), quando comparados às células não criopreservadas (1,0 ± 0,1 e 1,0 ± 0,2). Finalmente, células criopreservadas e cultivadas após dez passagens reduziram a atividade proliferativa reduzida (45,1% ± 12,0) e número de células viáveis (30,4% ± 5,7), quando comparadas as células criopreservadas e cultivadas após uma e três passagens. Em conclusão, fibroblastos viáveis podem ser estabelecidos a partir da orelha de onças-pintadas e que embora essas células não tenham mostrado alterações na viabilidade e atividade proliferativa, elas sofrem danos durante um longo cultivo e criopreservação nas condições estudadas
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    Efeitos do óleo essencial da casca de Citrus sinensis no meio de maturação in vitro sobre oócitos bovinos e seu status oxidativo
    (2022-02-17) Aquino, Leonardo Vitorino Costa de; Pereira, Alexsandra Fernandes; Bertini, Luciana Medeiros; Pereira, Alexsandra Fernandes; Bertini, Luciana Medeiros; Bertini, Luciana Medeiros; Silva, Andréia Maria da
    O uso de antioxidantes naturais em meio de maturação pode ser uma alternativa para reduzir os efeitos negativos do estresse oxidativo produzido durante a produção in vitro de embriões (PIVE). Testes in vitro demonstraram a capacidade do óleo essencial da casca de Citrus sinensis (OECS) em diminuir as espécies reativas de oxigênio (EROs), indicando que ele pode ser um interessante agente antioxidante durante a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos. Portanto, o objetivo foi avaliar os efeitos do OECS no meio de MIV sobre complexos cumulus-oócito (CCOs) bovinos e seu status oxidativo, especificamente quanto à expansão e viabilidade das células do cumulus, maturação nuclear, maturação citoplasmática, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e níveis intracelulares de glutationa (GSH). Inicialmente, o OECS foi extraído por hidrodestilação das cascas em aparelho do tipo Clevenger. A composição química do OECS foi realizada por meio de cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massa. O OECS apresentou como constituintes D-limoneno (48,5%), α-terpineol (40,2%) e outros compostos (11,3%). Oócitos foram maturados nas seguintes suplementações: controle (sem antioxidante), CIS (100 µM de cisteamina), OECS10 (10 µg/mL de OECS), OECS30 (30 µg/mL de OECS) e OECS50 (50 µg/mL de OECS). Todos os dados foram expressos com média ± erro padrão e analisados usando o software StatView 5.0 (P < 0,05). Um total de 480 ovários foi empregado para adquirir 1877 oócitos imaturos viáveis (3,9 oócitos viáveis/ovário) que foram selecionados e distribuídos em vinte repetições. Embora todos os grupos contendo antioxidante tenham aumentado a viabilidade das células do cumulus (CIS: 83,9 ± 1,6% vs. OECS10: 84,0 ± 2,0% vs. OECS30: 84,7 ± 2,2% vs. OECS50: 83,8 ± 1,6%) quando comparados ao controle (78,9 ± 1,8%), apenas CIS (99,6 ± 0,4%), OECS10 (100 ± 0,0%) e OECS30 (99,1 ± 0,9%) promoveram aumento na expansão dessas células quando comparados ao controle (96,4 ± 1,8%) e OECS50 (94,7 ± 3,0%, P < 0,05). O OECS10 (83,2 ± 3,0%) e o OECS30 (84,6 ± 2,4%) garantiram uma taxa maior de primeiro corpúsculo polar (1CP) quando comparado ao OECS50 (77,0 ± 2,8%). Nenhuma diferença foi observada para as taxas de metáfase II (MII) com valores variando de 69,1 ± 5,1% a 75,7 ± 3,3% entre os grupos contendo antioxidante (P > 0,05). Além disso, nenhuma diferença foi observada nas taxas de maturação citoplasmática, com valores variando de 78,7 ± 4,5% a 86,5 ± 3,9% entre os grupos contendo antioxidante (P > 0,05). Todos os tratamentos antioxidantes resultaram em diminuição de EROs em unidades de fluorescência arbitrária (CIS: 0,39 ± 0,24 vs. OECS10: 0,39 ± 0,18 vs. OECS30: 0,50 ± 0,44 vs. OECS50: 0,60 ± 0,44), quando comparado ao controle (1,00 ± 0,65). Nenhuma diferença foi observada para os níveis de ΔΨm e GSH (P > 0,05). Em conclusão, embora todas as concentrações de OECS tenham promovido redução de EROs, as concentrações de 10 e 30 µg/mL de OECS garantiram melhores taxas de qualidade oocitária após a maturação. Portanto, o OECS, em concentrações definidas, adicionado ao meio de MIV, pode ser um interessante substituto de composto sintético para a redução dos danos causados pelo estresse oxidativo em oócitos bovinos
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    Conservação de tecido somático de peixe-boi marinho, Trichechus Manatus Manatus (Linnaeus, 1758) usando diferentes técnicas e soluções de criopreservação
    (2022-03-25) Nascimento, Matheus Barbosa do; Pereira, Alexsandra Fernandes; Pereira, Alexsandra Fernandes; Attademo, Fernanda Löffler Niemeyer; Borges, Alana Azevedo; Silva, Andréia Maria da
    Os criobancos de tecidos somáticos são importantes ferramentas para a conservação e conhecimento das espécies, especialmente aquelas ameaçadas de extinção como o peixe-boi marinho, que vem tendo sua população reduzida por ações antrópicas. Assim, faz-se necessário a otimização de protocolos para redução de danos ocasionados pelas técnicas de criopreservação. Diante deste cenário, o presente trabalho teve como objetivos avaliar o potencial da criopreservação para tecidos somáticos de peixe-boi marinho (Etapa 1), bem como aperfeiçoar o protocolo de vitrificação (Etapa 2). Para tanto, foram coletados fragmentos oriundos da pele de seis peixes-boi marinho mantidos no Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Mamíferos Aquáticos, na Ilha de Itamaracá, Pernambuco, e divididos em duas etapas. Na primeira etapa, fragmentos foram distribuídos nos grupos congelação lenta (CL) e vitrificação em superfície sólida (VSS). Já na segunda etapa, fragmentos foram alocados nos grupos vitrificados com diferentes soluções: 3M-EG+3MDMSO, 1,5M-EG+1,5M-DMSO, 3M-EG e 3M-DMSO. Tecidos não criopreservados foram utilizados como grupo controle nas duas etapas. Para todos os experimentos, fragmentos foram avaliados quanto à ultraestrutura, espessura da derme, quantificação de fibroblastos, percentual de fibras colágenas e potencial proliferativo tecidual. Além disso, células resultantes dos explantes cultivados foram avaliadas quanto à morfologia, aderência, viabilidade, atividade proliferativa, atividade metabólica, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e níveis de apoptose. Na primeira etapa, a VSS não alterou a espessura da derme (P > 0,05), mas, ambas as técnicas diminuíram a quantidade de fibroblastos e aumentaram o percentual de fibras colágenas (P < 0,05). A CL manteve o potencial proliferativo tecidual, semelhante aos tecidos não criopreservados. No cultivo in vitro, apenas fragmentos do grupo VSS não apresentaram crescimento celular no período de 60 dias. Para o grupo CL, células obtidas não apresentaram redução na sua viabilidade e atividade proliferativa (P > 0,05), entretanto, houve redução no metabolismo e aumento dos níveis de apoptose, EROs e ΔΨm em comparação com células de tecidos não criopreservados. Já na segunda etapa, não houve diferença na ultraestrutura, sendo observado aumento na espessura da derme no grupo 1,5M-EG+1,5M-DMSO. Em todos os grupos vitrificados houve redução nos fibroblastos e aumento da matriz colágena (P < 0,05). Contudo, a vitrificação com 3,0M-EG+3,0M-DMSO manteve o potencial proliferativo dos tecidos. Nenhum dos fragmentos vitrificados foram capazes de produzir células em cultivo in vitro. Em conclusão, tecidos somáticos de peixe-boi marinho podem ser criopreservados por congelação lenta, produzindo células viáveis após cultivo in vitro. Os tecidos quando vitrificados, mesmo com redução na concentração, bem como a associação dos crioprotetores intracelulares não permitiram a obtenção de células, o que evidencia necessidade do aperfeiçoamento de protocolos, visando aumentar a qualidade dos bancos de tecidos somáticos nesta espécie
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    Seleção para resistência e resiliência a endoparasitoses como estratégia para a conservação de ovinos nativos
    (2022-02-28) Monteiro, Hudson de Queiroz; Façanha, Débora Andrea Evangelista; Façanha, Débora Andrea Evangelista; Façanha, Débora Andrea Evangelista; Bezerra, Ana Carla Diógenes Suassuna; Leite, Jacinara Hody Gurgel Morais
    A Morada Nova é uma raça nativa do nordeste brasileiro. Devido a introdução de raças exóticas na produção de ovinos houve erosão genética da raça, principalmente na variedade branca. A conservação dos recursos genéticos é essencial para a manutenção da agrobiodiversidade. Infecções parasitárias causadas por endoparasitas são a principal preocupação e obstáculo enfrentado pelos criadores de ovelhas, devido a essa problemática o objetivo desse estudo é fornecer ferramentas para a conservação dos ovinos da raça Morada Nova, variedade Branca, através de marcadores fenotípicos para seleção de animais resistentes ou resilientes às endoparasitoses nos rebanhos comerciais. A pesquisa foi realizada em 7 rebanhos, avaliando-se um total de 90 fêmeas adultas, sendo todas matrizes da raça Morada Nova, variedade branca, nos estados do Rio Grande do Norte e Ceará. Foram feitas duas visitas para coleta de dados em cada propriedade. As datas das visitas foram divididas de acordo com o período do ano em que há o maior e o menor índice pluviométrico, dividindo-os em período seco e período chuvoso. As coletas do período seco foram realizadas nos meses de setembro e outubro e as coletas do período chuvoso em abril e maio. O levantamento dos dados de todos os animais foi feito através da coleta de fezes, sangue, aferição da temperatura, auscultação dos batimentos cardíacos e frequência respiratória, avaliação do escore Famacha©, medição de peso e avaliação do escore de condição corporal. O gênero Haemonchus foi prevalente em todas as propriedades. Durante todo o experimento as médias de contagem de ovos fecais se mantiveram abaixo de 400 e as médias de hematócrito acima de 30%. O escore Famacha© apresentou maior frequência nos valores 3 e 4, enquanto os valores de escore de condição corporal obtiveram maiores frequências entre 2 e 2,75. A associação dos marcadores fenotípicos contagem de ovos fecais, hematócrito e escore Famacha© mostrou que a Morada Nova variedade branca apresenta boa resistência e resiliência aos endoparasitas da região. Essa informação pode ajudar no desenvolvimento de programas de seleção da raça, concedendo visibilidade a variedade branca, modificando a visão dos produtores quanto as suas qualidades e, consequentemente, aumentando sua população que estava em risco de extinção
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    Morfologia testicular de juvenis de Oscar Astronotus Ocellatus AGASSIZ, 1831 (PIRCES: Perciformes, Cichlidade)
    (2022-03-30) Albuquerque, Danilo Lourenço de; Bezerra, Marcelo Barbosa; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; Bezerra, Marcelo Barbosa; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; Teófilo, Tiago da Silva; Oliveira, Moacir Franco de
    Dentre os teleósteos, o Astronotus ocellatus (Oscar) se destaca pela sua beleza e docilidade despertando grande interesse dos aquariofilistas, necessitando de maior compreensão dos elementos que compõe sua reprodução. Com isso, objetivou-se caracterizar as gônadas de machos de Astronotus ocellatus (Oscar) juvenis, através de avaliações morfológicas, morfométricas e estereológicas. Macroscopicamente os animais tiveram seus dados biométricos coletados e suas gônadas avaliadas quanto localização e morfologia. Microscopicamente as gônadas foram processadas através de histologia padrão de luz e avaliadas quanto à sua morfologia, estereologia e morfometria. Através do cálculo de diâmetro, os dados obtidos foram submetidos à estatística descritiva através do DP (± desvio padrão), no qual foram determinados o diâmetro das espermatogônias primárias e secundárias. Macroscopicamente as gônadas apresentaram estruturas lisas, bilaterais, filiforme, alongadas, uniforme, de cor translúcida a esbranquiçada, aderidos dorsalmente à cavidade celomática, cranialmente bifurcados e caudalmente se unem originando o ducto espermático, que segue até a papila urogenital para que ocorra a espermiação, apresentando IGS de 0,023. Microscopicamente foi observado a presença da túnica albugínea revestindo o testículo na sua porção externa e internamente observouse a diferenciação das gônadas em região tubular e intertubular. Na região tubular foram observados cistos de células grandes, com núcleo redondo a ovoide, basofílico, cromatina condensada apresentando um ou dois nucléolos e citoplasma pouco evidente, que foram identificadas como espermatogônias primárias e secundárias. As espermatogônias primárias apresentaram maior tamanho entre as células da linhagem germinativa (9,85 ± 1,13 µm) e cromatina menos densa. Já as espermatogônias secundárias possuíam tamanho menor (7,04 ± 0,78 µm), cromatina mais densa, com aglomerados redondos dispostos sobre o envelope nuclear. Na região intertubular foram observados a presença de vasos sanguíneos, tecido conjuntivo frouxo e células de Leydig. Na avaliação estereológica do compartimento testicular, foi evidenciado maior predominância das estruturas que compõem o compartimento tubular (88%), como espermatogônias primárias, espermatogônias secundárias e células de Sertoli, e menor proporção de compartimento intertubular (12%)
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    Biometria e tônus testiculares e concentrações séricas de testosterona em machos de antas brasileiras (Tapirus Terrestres) nos biomas Pantanal e Cerrado, Brasil
    (2022-04-29) Brasil, Andreza Vieira; Silva, Alexandre Rodrigues; Silva, Alexandre Rodrigues; Silva, Alexandre Rodrigues; Carneiro, Gustavo Ferrer; Costa, Leonardo Lelis de Macedo
    Este estudo teve como objetivo contribuir para o conhecimento sobre a fisiologia reprodutiva da Anta Brasileira (Tapirus terrestris) por meio da descrição das concentrações séricas de testosterona, biometria testicular e tônus testicular de indivíduos que vivem nos biomas Pantanal e Cerrado do Brasil, verificando a existência de sazonalidade para a espécie, e investigando correlações entre esses parâmetros reprodutivos e idade e peso individual. Os dados meteorológicos (temperatura do ar, velocidade do vento, umidade relativa e radiação global) dos locais de estudo foram caracterizados por meio de estações automatizadas do Instituto Nacional de Meteorologia (INMET). De 2015 a 2020, foram coletados dados de campo de 22 e 11 antas selvagens machos dos biomas Pantanal e Cerrado, respectivamente. Após a captura e contenção química, foram estimadas a idade e o peso dos animais. Amostras de sangue foram coletadas para determinar as concentrações séricas de testosterona usando radioimunoensaio. As medidas de biometria testicular incluíram largura, comprimento, altura e volume, enquanto o tônus testicular foi atribuído usando pontuações de 3 (firme) a 1 (suave). A idade, o peso e as concentrações de testosterona dos animais não diferiram entre os dois biomas (P > 0,05). Correlações positivas foram encontradas entre idade e peso (ρ = 0,86; P < 0,001), e níveis séricos de testosterona com idade (ρ = 0,45; P = 0,0047) e peso (ρ = 0,51; P = 0,0011). O volume testicular foi positivamente correlacionado com a idade (ρ = 0,75; P < 0,0001), peso (ρ = 0,65; P = 0,0011) e níveis séricos de testosterona (ρ = 0,42; P = 0,0081). Além disso, o tônus testicular em indivíduos adultos (> 48 meses) foi significativamente maior do que em indivíduos mais jovens (P < 0,05). A consistência testicular foi positivamente correlacionada com o peso (ρ = 0,36; P = 0,0241) e os níveis séricos de testosterona (ρ = 0,38; P = 0,0174). O efeito sazonal na reprodução da anta foi ausente, mas o tônus testicular foi influenciado pela velocidade do vento (ρ = 0,37; P = 0,0211) e umidade do ar (ρ = 0,37; P = 0,0262). Este estudo é a primeira descrição científica de parâmetros reprodutivos de machos de Anta Brasileira