Avaliação de uma formulação vacinal multiproteica contendo antígenos recombinantes de Corynebacterium pseudotubertculosis contra a linfadenite caseosa em ovinos

Abstract

A LC é uma doença infectocontagiosa, crônica e debilitante de ovinos e caprinos que tem distribuição mundial e alta prevalência em rebanhos causando prejuízos econômicos. O tratamento com antibióticos é pouco eficaz, devido ao agente causador, a bactéria intracelular facultativa Corynebacterium pseudotuberculosis, formar biofilmes envolvendo a lesão, o que dificulta a ação das drogas na eliminação do patógeno. Com isso, a medida profilática mais eficiente é a vacinação dos animais saudáveis, porém até o momento nenhuma das vacinas comerciais disponíveis conferem proteção adequada. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial imunomodulador dos três antígenos recombinantes (rPLD, rCP09720 e rCP01850) agrupados em uma única formulação vacinal associados ao adjuvante saponina para ser testado na espécie alvo (ovinos). As proteínas recombinantes, rPLD, rCP01850 e rCP09720 foram expressas de forma heteróloga em Escherichia coli e purificadas. Para os experimentos de imunização e desafio, foram utilizados 12 ovinos soronegativos para a LC, que foram divididos em dois grupos de seis animais cada e distribuídos randomicamente nos seguintes grupos: G1, inoculado com solução salina 0,9% (grupo controle); G2, imunizado com a formulação multiproteica contendo 100 µg de cada proteina. Foram administradas duas doses da formulação vacinal por via subcutânea, intervaladas por 21 dias. O desafio foi realizado 30 dias após a última dose da vacina através da inoculação por via subcutanea de 105 UFC da cepa virulenta MIC6 de C. pseudotuberculosis. Após desafio os animais foram avaliados clinicamente por 12 semanas, e ao final deste período foram eutanasiados. Os linfonodos e órgãos internos foram avaliados quanto à presença de lesões. Amostras de sangue foram coletadas um dia antes da primeira imunização (dia 0), e nos dias 21, 49, 77, 105 e 133 do experimento para detecção de anticorpos anti-rPLD, anti-rCP01850 e anti-rCP09720 por de ELISA indireto. Para a designação dos níveis das lesões foram atribuídos escores conforme a gravidade das lesões. O aumento significativo nos níveis de IgG anti-rPLD, anti-rCP01850 e anti-rCP09720 foi observado a partir do 21º dia experimental. Os valores dos níveis de IgG permaneceram até o final do experimento (dia 133). Na análise das lesões macroscópicas e microscópicas encontradas nos linfonodos maiores scores no grupo não vacinado (G1). Quanto a lesões nos órgãos foi possível observar uma redução significativa de 100 % das lesões pulmonares no grupo vacinado (G2). Assim, conclui-se que a formulação vacinal contendo as proteínas recombinantes rPLD, rCP01850 e rCP09720 pode ser uma estratégia promissora para o desenvolvimento de vacinas contra a LC, visto que, após o desafio nos ovinos contra o C. pseudotuberculosis, ocorreu redução de lesões em linfonodos e pulmões bem como a indução de resposta imune humoral.