Efeito de diferentes meios no cultivo organotípico in vitro de fragmentos testiculares de catetos (Pecari tajacu linnaeus, 1758) adultos - Matos, Tayná Moura (Brasil, 2026)
Esta dissertação objetivou definir um protocolo eficiente para o cultivo in vitro de tecido testicular de catetos adultos, de modo a viabilizar a utilização e a avaliação do germoplasma masculino previamente armazenado em biobancos. No primeiro capítulo foram investigados os efeitos de meios de cultura suplementados sobre a morfologia, viabilidade, apoptose e integridade do DNA de fragmentos testiculares de catetos adultos in vitro. Cinco testículos foram coletados, dissecados e cultivados em meios DMEM/F12, DMEM ou MEM. Esses meios foram suplementados igualmente com 10% de soro fetal bovino, 25 mM de HEPES, 2 μL/mL de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de solução de aminoácidos não essenciais (NEAA), 1% de solução vitamínica, 0,2% de albumina sérica bovina, 1% de solução antibiótico-antifúngica, 10 ng/mL de LH/FSH, 20 ng/mL de mEGF, 10 ng/mL de GDNF e 10 ng/mL de bFGF. Os fragmentos foram cultivados em um sistema organotípico em gel de agarose a 0,75% por 7 e 14 dias a 34 °C e 5% de CO₂. O tempo de cultivo reduziu os escores morfológicos em comparação com o controle fresco (P < 0,05). O meio MEM apresentou melhor preservação morfológica da vacuolização da membrana em 7 dias e de todos os parâmetros em 14 dias. Por outro lado, o meio DMEM apresentou maior estabilidade temporal, garantindo um microambiente mais consistente. A viabilidade celular foi mantida, sem diferenças entre os tratamentos (P > 0,05). As taxas de apoptose mantiveram-se constantes, sugerindo equilíbrio celular ao longo do experimento. O meio MEM preservou melhor a integridade do DNA por até 7 dias, enquanto o meio DMEM manteve a estabilidade por 14 dias. Em conclusão, os meios MEM e DMEM, quando adequadamente suplementados, são adequados para o cultivo organotípico de tecido testicular de catetos adultos por até 14 dias. No segundo capítulo, investigaram-se os efeitos de diferentes meios de cultura suplementados na morfologia, viabilidade celular e apoptose de fragmentos testiculares de catetos adultos previamente criopreservados e posteriormente cultivados in vitro. Cinco testículos foram coletados, dissecados e cultivados em meios DMEM/F12 e DMEM. Ambos os meios receberam suplementação idêntica, contendo 10% de soro fetal bovino, 25 mM de HEPES, 2 μL/mL de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de aminoácidos não essenciais (NEAA), 1% de solução vitamínica, 0,2% de albumina sérica bovina, 1% de solução antibiótico-antifúngica, 10 ng/mL de LH/FSH, 20 ng/mL de mEGF, 10 ng/mL de GDNF e 10 ng/mL de bFGF. Fragmentos testiculares foram cultivados em um sistema organotípico utilizando gel de agarose a 0,75% por períodos de 7 e 14 dias, sob condições controladas de 34 °C e atmosfera contendo 5% de CO₂. O tempo de cultivo reduziu significativamente os escores morfológicos em comparação com o controle fresco e criopreservado (P < 0,05). Após 7 dias de cultivo, o meio DMEM proporcionou melhor preservação morfológica, especialmente nos parâmetros de separação da membrana basal e estrutura tubular; entretanto, após 14 dias, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre as avaliações dos meios. A predição celular permaneceu estável ao longo do experimento, sem diferenças entre os tratamentos (P > 0,05). Da mesma forma, as proporções de células apoptóticas permaneceram constantes durante todo o período experimental, mantendo a homeostase celular. Em conclusão, os meios DMEM/F12 e DMEM, quando suplementados adequadamente, mostraram-se adequados para o cultivo organotípico de tecido testicular de catetos adultos, a partir de amostras previamente criopreservadas por até 14 dias.
Effect of different media on the in vitro organotypic culture of testicular fragments of adult pectanus catetos (Pecari tajacu linnaeus, 1758)
Keywords: CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA; Biobanco; Tecido testicular; Cultivo in vitro; Biobank; Testicular tissue cryopreservation; In vitro culture; Cateto; Membrana basal; Germoplasma masculino; Preservação morfológica; Vacuolização da membrana; Homeostase celular