Estratégias de seleção e capacitação espermática para a produção in vitro de embriões em catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) - Santos, Maria Valéria de Oliveira (Brasil, 2023)
A produção de embriões por fertilização in vitro (FIV) possibilita uma abordagem científica, conservacionista e comercial dos catetos, mamíferos silvestres de importância biológica e com potencial de mercado. Contudo, informações sobre as variáveis envolvidas na seleção e capacitação espermática que antecede à FIV ainda são escassas em catetos. Assim, o objetivo foi aperfeiçoar o processamento espermático para a FIV em catetos. Para tanto, a presente tese foi dividida em duas etapas. A primeira etapa organizada em três experimentos teve como objetivo avaliar diferentes métodos de seleção espermática. No primeiro experimento, o efeito da centrifugação para remoção do plasma seminal antes do swim-up foi avaliado sobre a qualidade espermática. Neste experimento, o swim-up reduziu a motilidade (51,9 vs. 90,4%) e aumentou os níveis de espécies reativas de oxigênio em comparação com o controle (não selecionado), tendo a centrifugação prejudicado ainda mais a qualidade espermática. Este método não foi recomendado para catetos. No segundo experimento, as densidades do gradiente Percoll® (PG 45–90% e PG 35–70%) foram comparadas sobre os parâmetros de qualidade espermática. PG 45–90% melhoraram a velocidade média do trajeto (VAP; 96,8 vs. 69,7 μm/sec), velocidade linear (VSL; 88,4 vs. 56,0 μm/sec) e linearidade (LIN; 66,0 vs. 46,0%) em comparação ao grupo controle, enquanto PG 35–70% afetaram negativamente a motilidade e qualidade espermática. No terceiro experimento, o efeito do PG 45–90% e da lavagem por centrifugação (LC) foi avaliado sobre a cinética de motilidade espermática e fertilização heteróloga usando oócitos suínos. PG 45–90% melhoraram alguns parâmetros cinéticos de motilidade em comparação aos grupos controle e LC. Contudo, as taxas de clivagem (26,3 e 25,2%) e mórulas (10,5 e 8,1%) não diferiram entre os grupos. Assim, PG 45–90% e LC foram eficientes no isolamento de espermatozoides móveis de catetos, os quais foram capazes de fertilizar oócitos suínos e promover o desenvolvimento de embriões híbridos. Já a segunda etapa organizada em dois experimentos teve como objetivo determinar as condições de capacitação espermática, por meio da comparação do meio Tyrode albumina lactato piruvato (TALP) na ausência e na presença de heparina, cafeína e sua combinação por diferentes tempos de incubação (1, 3 e 6 h). No primeiro experimento, a influência das condições de capacitação foi avaliada sobre a qualidade espermática. Os parâmetros de motilidade progressiva (48,6 vs. 32,3%), retilinearidade (71,1 vs. 64,6%), LIN (40,7 vs. 35,2%) e espermatozoides rápidos (51,7 vs. 35,6%) foram superiores usando TALP com heparina em comparação ao TALP com cafeína. O meio TALP com heparina ou cafeína aumentaram a taxa de capacitação espermática em comparação com o TALP (75,5 vs. 75,9 vs. 55,0%, respectivamente), sendo a porcentagem máxima de capacitação alcançada após 3 h de incubação (77,5%). Adicionalmente, os espermatozoides submetidos à capacitação com heparina apresentaram menor estresse oxidativo após 1 h de incubação. Portanto, espermatozoides de catetos podem ser capacitados com cafeína ou heparina; mas a heparina melhorou a motilidade espermática, sendo recomendada para a capacitação espermática. No segundo experimento, a funcionalidade de espermatozoides capacitados em TALP com heparina foi avaliada comparando os tempos de incubação de 3 e 6 h. Não houve diferença entre os tempos de incubação na média de espermatozoides ligados à zona pelúcida de oócitos suínos (3 h: 47,0 vs. 6 h: 71,1 espermatozoides/oócito). Portanto, a incubação de gametas em TALP com heparina por 3 h pode ser eficiente para FIV na espécie. Em síntese, as condições de seleção e capacitação espermática foram estabelecidas e representam um avanço significativo para o desenvolvimento da FIV em catetos, permitindo sua utilização para a conservação e emprego comercial da espécie.
Sperm selection and capacitation strategies for in vitro embryo production in collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)
Keywords: CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA; mamíferos silvestres; fertilização in vitro; processamento espermático; espermatozoides; agentes capacitantes; wild mammals; in vitro fertilization; sperm processing; spermatozoa; capacitating agents