Caracterização morfológica e molecular de Cladosporium tenuissimum e efeito de óleos essenciais sobre seu crescimento in vitro

Abstract

objetivo deste estudo foi o de caracterizar, em nível morfológico e molecular, isolados de C. tenuissimum, causador da mancha marrom, a sua interação com aboboreira e meloeiro, por meio de análises de patogenicidade, e avaliar o efeito de óleos essenciais no crescimento in vitro do patógeno. Para isso, foram coletadas folhas de abóbora e melancia, e folhas e frutos de meloeiro com lesões necróticas moderadas a severas, em regiões produtoras do Rio Grande do Norte, Brasil. Um total de doze isolados (quatro de abóbora, um de melancia e sete de melão) foram obtidos a partir de folhas e frutos sintomáticos. Os isolados foram submetidos a análises morfológicas em microscópio óptico e de varredura, extração de DNA de pelo método SDS, sequenciamento do DNA com os primers ITS 1 e 2 e, de parte do gene TEF1α, análise filogenética pelo método da Análise de Máxima Verossimilhança e análise da diversidade genética com 19 marcadores ISSR e dez RAPD. O potencial patogênico dos isolados em plantas de abóbora e melão foi avaliado em casa-de-vegetação pela metodologia de suspensões de esporos (106 conídios/ml−1). Para avaliar o controle do crescimento in vitro de dois isolados distantes geneticamente, foram testados três óleos essenciais: canela cássia (Cinnamomum cassia), capim limão (Cymbopogon citratus) e manjericão (Ocimum basilicum), em duas contrações (0,125% e 0,5%) cada. No estudo da diversidade genética ambos os marcadores ISSR e RAPD foram eficazes na identificação de similaridade genética dos isolados, e produziram polimorfismo percentual 98% e 100%, respectivamente. A análise do dendrograma em conjunto indicou a formação de oito grupos principais, onde o coeficiente de similaridade genética variou de 0,21 (CMX02 e CML10) a 0,48 (CML07 e CML08). Todos os isolados apresentaram potencial patogenico para as plantas de abóbora e melão, variando na severidade. Na avaliação in vitro, canela cássia e capim limão inibiram 100% do crescimento dos isolados CML06 e CML07, enquanto que óleo de manjericão a 0,125% inibiram 84% e 78%, respectivamente. O isolado CML07 também apresentou na análise de similaridade em conjunto a maior distância genética dos demais isolados, sugerindo, dessa forma, que esse isolado possui genes que atuam de forma diferenciada, e que a presença da variação genética observada pode estar associada à maior incidência da doença. Este é o primeiro relato do patógeno em áreas produtoras no Rio Grande do Norte e no Brasil para Cucurbitáceas