Padronização de ELISA indireto utilizando a proteína rCP01850 de Corynebacterium pseudotuberculosis para o diagnóstico da Linfadenite Caseosa em caprinos

Abstract

A linfadenite caseosa (LC) é uma doença que atinge principalmente rebanhos de caprinos e ovinos. Em sua forma visceral o diagnóstico clínico é impossibilitado, tendo como alternativa o diagnóstico sorológico. O uso de proteínas recombinantes para diagnosticar a linfadenite caseosa vem crescendo nos últimos anos, e a proteína rCP01850 já apresentou resultados promissores no diagnóstico de LC em ovinos por ELISA indireto. Deste modo, considerando as diferenças entre as respostas imunológicas de caprinos e ovinos, o presente trabalho tem por objetivo realizar a padronização de um ELISA indireto utilizando a proteína rCP01850 para caprinos. Para tanto, a proteína rCP01850 foi expressa de forma heteróloga em Escherichia coli utilizando o plasmídeo pAE/cp01850 previamente construído. A proteína foi purificada utilizando cromatografia de afinidade ao níquel e quantificada utilizando o método do ácido bicinconínico (BCA). A identidade da proteína recombinante foi comprovada por western blot (WB) com anticorpo monoclonal anti-6x-his-tag. Para a padronização foi utilizado o método checkerboard titration, onde um pool de soros negativos e um pool de soros positivos foram utilizados. Um total de 70 soros caprinos, sendo 35 provenientes de animais com LC e 35 de animais negativos, oriundos de áreas negativas, foram utilizados para a avaliação do desempenho do teste padronizado. Como resultado da expressão da proteína recombinante testada, obtivemos um rendimento de 5,3 mg/L da proteína rCP01850 que apresentou aproximadamente 33,5 kDa no WB. O ELISA indireto utilizando a proteína rCP01850 para caprinos apresentou sensibilidade de 94,3%, especificidade de 100%, e acurácia de 99,7%, quando o ponto de corte foi 0,10425. Conclui-se que a proteína rCP01850 pode ser utilizada com grande precisão para o diagnóstico de LC em caprinos