Efeitos do óleo essencial da casca de Citrus sinensis no meio de maturação in vitro sobre oócitos bovinos e seu status oxidativo

Abstract

O uso de antioxidantes naturais em meio de maturação pode ser uma alternativa para reduzir os efeitos negativos do estresse oxidativo produzido durante a produção in vitro de embriões (PIVE). Testes in vitro demonstraram a capacidade do óleo essencial da casca de Citrus sinensis (OECS) em diminuir as espécies reativas de oxigênio (EROs), indicando que ele pode ser um interessante agente antioxidante durante a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos. Portanto, o objetivo foi avaliar os efeitos do OECS no meio de MIV sobre complexos cumulus-oócito (CCOs) bovinos e seu status oxidativo, especificamente quanto à expansão e viabilidade das células do cumulus, maturação nuclear, maturação citoplasmática, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e níveis intracelulares de glutationa (GSH). Inicialmente, o OECS foi extraído por hidrodestilação das cascas em aparelho do tipo Clevenger. A composição química do OECS foi realizada por meio de cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massa. O OECS apresentou como constituintes D-limoneno (48,5%), α-terpineol (40,2%) e outros compostos (11,3%). Oócitos foram maturados nas seguintes suplementações: controle (sem antioxidante), CIS (100 µM de cisteamina), OECS10 (10 µg/mL de OECS), OECS30 (30 µg/mL de OECS) e OECS50 (50 µg/mL de OECS). Todos os dados foram expressos com média ± erro padrão e analisados usando o software StatView 5.0 (P < 0,05). Um total de 480 ovários foi empregado para adquirir 1877 oócitos imaturos viáveis (3,9 oócitos viáveis/ovário) que foram selecionados e distribuídos em vinte repetições. Embora todos os grupos contendo antioxidante tenham aumentado a viabilidade das células do cumulus (CIS: 83,9 ± 1,6% vs. OECS10: 84,0 ± 2,0% vs. OECS30: 84,7 ± 2,2% vs. OECS50: 83,8 ± 1,6%) quando comparados ao controle (78,9 ± 1,8%), apenas CIS (99,6 ± 0,4%), OECS10 (100 ± 0,0%) e OECS30 (99,1 ± 0,9%) promoveram aumento na expansão dessas células quando comparados ao controle (96,4 ± 1,8%) e OECS50 (94,7 ± 3,0%, P < 0,05). O OECS10 (83,2 ± 3,0%) e o OECS30 (84,6 ± 2,4%) garantiram uma taxa maior de primeiro corpúsculo polar (1CP) quando comparado ao OECS50 (77,0 ± 2,8%). Nenhuma diferença foi observada para as taxas de metáfase II (MII) com valores variando de 69,1 ± 5,1% a 75,7 ± 3,3% entre os grupos contendo antioxidante (P > 0,05). Além disso, nenhuma diferença foi observada nas taxas de maturação citoplasmática, com valores variando de 78,7 ± 4,5% a 86,5 ± 3,9% entre os grupos contendo antioxidante (P > 0,05). Todos os tratamentos antioxidantes resultaram em diminuição de EROs em unidades de fluorescência arbitrária (CIS: 0,39 ± 0,24 vs. OECS10: 0,39 ± 0,18 vs. OECS30: 0,50 ± 0,44 vs. OECS50: 0,60 ± 0,44), quando comparado ao controle (1,00 ± 0,65). Nenhuma diferença foi observada para os níveis de ΔΨm e GSH (P > 0,05). Em conclusão, embora todas as concentrações de OECS tenham promovido redução de EROs, as concentrações de 10 e 30 µg/mL de OECS garantiram melhores taxas de qualidade oocitária após a maturação. Portanto, o OECS, em concentrações definidas, adicionado ao meio de MIV, pode ser um interessante substituto de composto sintético para a redução dos danos causados pelo estresse oxidativo em oócitos bovinos