Investigação do potencial antioxidante do óleo essencial da casca de Citrus sinensis sobre a competência meiótica de oócitos suínos

Abstract

Os antioxidantes obtidos a partir de fontes naturais, como os óleos essenciais, são uma das alternativas para a maturação in vitro (MIV) de oócitos suínos, quando comparados aos antioxidantes sintéticos, como a cisteamina, visto que estudos têm demonstrado a eficiência dos óleos essenciais na melhoria das taxas de MIV, bem como na redução das espécies reativas de oxigênio (EROs). Nesse sentido, o óleo essencial extraído da casca de Citrus sinensis pode ser utilizado na maturação in vitro de oócitos suínos devido à sua ação antioxidante comprovada em concentrações de 10 a 50 μg/mL. Portanto, considerando a eficiência antioxidante do óleo essencial da casca de Citrus sinensis (OECS), o estudo objetivou avaliar o seu efeito sobre a MIV de oócitos suínos, como alternativa ao antioxidante sintético. Para tanto, oócitos suínos provenientes de ovários de abatedouro local foram recuperados e submetidos à MIV. Duas etapas foram realizadas neste estudo. A primeira etapa teve como objetivo determinar a melhor concentração de OECS em associação a cisteamina a partir da seguinte comparação: i) Controle (cisteamina: 100 μM); ii) Cisteamina + 10 μg/mL de OECS (CIS+OECS10); iii) Cisteamina + 30 μg/mL de OECS (CIS+OECS30); iv) Cisteamina + 50 μg/mL de OECS (CIS+OECS50). Após a MIV, oócitos foram avaliados quanto à expansão e viabilidade das células do cumulus, maturação nuclear (primeiro corpúsculo polar [1CP] e metáfase II) e citoplasmática, padrão mitocondrial, níveis de EROs e atividade bioenergética (ΔѰm). Na segunda etapa a melhor concentração obtida anteriormente do OECS, foi avaliada quanto a sua ação antioxidante em função do seu efeito sinérgico ou substituível à cisteamina, considerando os grupos: i) Cisteamina (100 μM) (CIS); ii) Cisteamina + melhor concentração do OECS (CIS+OECS); iii) melhor concentração do OECS (OECS). Após a MIV, oócitos foram avaliados quanto à expansão e viabilidade das células do cumulus, 1CP e níveis de EROs. Todos os oócitos foram maturados por 44 h sob temperatura e atmosfera modificada (38,5 °C; 6,5% CO2). Todos os resultados foram expressos como média ± erro padrão de dez (primeira etapa) e três (segunda etapa) repetições. Dados em percentuais foram comparados pelo teste do qui-quadrado, enquanto os demais valores foram transformados em arco-seno e avaliados por ANOVA e teste e Tukey. Na primeira etapa, 861 oócitos imaturos e viáveis foram selecionados a partir de 282 ovários (3,05 oócito/ovário) e submetidos à MIV. A taxa de expansão das células do cumulus foi maior em CIS+OECS10 (70,8 ± 4,4) em comparação com CIS+OECS50 (57,1 ± 5,4), mas ambos foram semelhantes a CIS+OECS30 e ao controle (P < 0,05). Além disso, o grupo CIS+OECS50 (90,3% ± 2,3) foi superior ao OECS10 (88,0% ± 2,6), OECS30 (87,6% ± 2,9) e controle (75,1% ± 4,9) após análise da viabilidade das células do cumulus. Nenhuma diferença foi observada após a análise do 1CP, metáfase II e maturação citoplasmática (P > 0,05). Contudo, CIS+OECS50 (85,7% ±11,1) foi superior ao controle (63,0% ± 3,03) após a avaliação do padrão mitocondrial. Quanto aos níveis de EROs, CIS+OECS50 (0,62 ± 0,17) resultou num menor nível quando comparado ao controle (1,00 ± 0,44) e OECS10 (1,03 ± 0,45), embora a ΔѰm não tenha diferido entre os grupos. Portanto, considerando que o CIS+OECS50 foi avaliado como o melhor grupo, na segunda etapa foram utilizados 141 oócitos imaturos e viáveis a partir de 54 ovários (2,6 oócito/ovário). Quanto à expansão das células do cumulus, nenhuma diferença foi observada entre os grupos, embora o OECS50 (92,4% ± 0,6) tenha resultado numa melhor viabilidade das células do cumulus comparado ao CIS (88,4% ± 1,1) e CIS+OECS50 (81,7% ± 3,1). Quanto ao 1CP e níveis de EROs, nenhuma diferença foi observada (P > 0,05). Diante disso, pôde-se concluir que o OECS na concentração de 50 μg/mL pode ser utilizado como um agente substituto a cisteamina, uma vez que melhorou parâmetros relacionados à maturação e fisiologia de oócitos suínos.