Avaliação da eficiência de diferentes soluções crioprotetoras na conservação de células somáticas de jaguatirica, Leopardus pardalis (Linnaeus, 1758)

Abstract

A jaguatirica, maior espécie de pequenos felinos do Brasil, é um carnívoro de grande importância ecológica. No Brasil, esta espécie se encontra em risco de extinção e a formação de biobancos de recursos somáticos representa uma ferramenta para a conservação da espécie. Contudo, existem fatores que podem afetar o sucesso desses bancos, como a solução de criopreservação empregada. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito do tipo de crioprotetor intracelular, dimetilsulfóxido (DMSO) e etilenoglicol (EG), na presença ou ausência de um crioprotetor extracelular, a sacarose (SAC), sobre a morfologia, viabilidade e atividade metabólica de células somáticas após a descongelação. Para tanto, amostras de pele do pavilhão auricular apical foram recuperadas de uma jaguatirica encontrada no centro da cidade de Mossoró e levada ao hospital veterinário, da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA). No laboratório, as amostras foram cultivadas até obtenção de células somáticas. Em seguida, células foram criopreservadas por congelação lenta em meio essencial mínimo modificado por Dulbecco com 10% de soro fetal bovino, de acordo com os grupos: 10% de EG (grupo EG), 10% de DMSO (grupo DMSO), 5% de EG + 5% de DMSO (grupo EG-DMSO), 10% de EG + 0,2 M de SAC, 10% de DMSO + 0,2 M de SAC, 5% de EG + 5% de DMSO + 0,2 M de SAC. Células não submetidas à criopreservação foram usadas como controle (grupo controle). Após duas semanas, células foram descongeladas e submetidas à análise morfológica usando microscopia invertida, viabilidade usando o ensaio de azul de tripan e atividade metabólica pelo ensaio de brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium] (MTT). Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão de quatro repetições. Para todas as análises foi utilizado o software Graphpad Instat 3.06, onde todos os resultados foram analisados por ANOVA seguido de teste Tukey ou teste t não pareado. A significância foi definida em P < 0,05. Quanto à morfologia, as células do grupo não criopreservado mantiveram um padrão de confluência, variando entre 75–100%, enquanto os grupos submetidos à criopreservação demonstraram confluências de no máximo 40%. Quanto à viabilidade, não houve diferença entre os grupos criopreservados, variando entre 53,1 ± 10,4% e 79,6 ± 3,0%, e grupo não criopreservado (85,2 ± 6,1%). Já em relação à atividade metabólica, os grupos criopreservados variaram entre 71,3 ± 36,9% e 100 ± 36,9% não diferiram do grupo não criopreservado (100 ± 13,4%). Em conclusão, todas as combinações de soluções crioprotetoras utilizadas nesse estudo mostraram eficácia, mesmo com a redução da concentração dos crioprotetores intracelulares (EG e DMSO) na presença ou não do crioprotetor extracelular (SAC). Assim, as informações denotadas por este estudo visam contribuir para a conservação da jaguatirica, uma vez que essas células podem ser empregadas em técnicas de reprodução assistida.