Avaliação da resposta imune humoral em ovinos inoculados com rCP40 de Corynebacterium pseudotuberculosis associada ao Bacilo de Calmette-Guérin (BCG) contra linfadenite caseosa

Abstract

A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença crônica que costuma afetar pequenos ruminantes. Esta é causada pelo agente infeccioso Corynebacterium pseudotuberculosis, uma bactéria gram positiva e intracelular facultativa. O cenário de tratamentos para essa infecção não é propício, já que a antibioterapia apresenta algumas limitações em seu uso, sendo as vacinas as opções mais viáveis no controle da LC. Nesse contexto, as vacinas recombinantes de subunidade demonstraram níveis de proteção satisfatórios contra a doença em modelo murino, todavia, os estudos com essas formulações nas espécies alvo são escassos. O presente trabalho tem como propósito a avaliação da resposta imune humoral de ovinos imunizados com a proteína recombinante rCP40 de Corynebacterium pseudotuberculosis e o Mycobacterium bovis BCG Pasteur. Para isso, uma cepa específica de E. coli foi selecionada para obtenção da proteína, a partir da transformação dessa bactéria com o plasmídeo pAE/cp40. O cultivo se deu em meio LB líquido contendo ampicilina e a expressão foi induzida com IPTG. O Western Blot foi utilizado para confirmar a expressão da proteína em questão, que foi purificada por cromatografia de afinidade ao níquel. No que concerne a imunização, foram vacinados 12 ovinos, divididos randomicamente em 2 grupos: G1 (controle), inoculado com solução salina 0,9% e, G2, imunizado com a vacina contendo 200 μg da proteína recombinante (rCP40) e 106 UFC de M. bovis BCG Pasteur em um volume final de 1 mL. Foi efetuada a coleta de sangue nos dias 0, 21, 49, 77, 105 e 133 do experimento para realização do ELISA indireto, padronizado através do método de Checkerboard titration, a fim de analisar a produção de anticorpos. Como resultados, observou-se aumento significativo (p < 0,05) de IgG anti-rCP40 de forma sustentada a partir do dia 21 até o dia 133. Em relação a IgG anti-BCG, não houve aumento significativo em comparação ao grupo controle durante todo o experimento, contudo foi observado nos dias 49, 105 e 133 níveis maiores de IgGs anti-BCG no grupo vacinado. Em conclusão, a partir da análise constatou-se um aumento dos níveis de IgG anti-rCP40 de C. pseudotuberculosis de forma sustentada em ovinos imunizados, confirmando a hipótese de que a vacina aqui descrita permitiu o aumento da resposta imune humoral.