Efeito do extrato da fumaça de cigarro na morfologia e estresse oxidativo de tecido ovariano caprino cultivado in vitro

Abstract

Dados fornecidos pela OMS (2021) mostram que o hábito de fumar está presente na vida de 7,8% de mulheres no mundo. Embora seja consenso o prejuízo reprodutivo dos componentes do cigarro, o mecanismo pelo qual a fumaça de cigarro altera a morfologia da reserva folicular ovariana ainda é pouco compreendido. Esse estudo buscou avaliar o efeito do extrato da fumaça de cigarro na morfologia e estresse oxidativo de tecido ovariano caprino cultivado in vitro. Além disso, buscou-se determinar se é o estresse oxidativo o mecanismo pelo qual a fumaça de cigarro afeta os folículos. 6 ovários foram coletados em abatedouro local, onde a sua utilização está de acordo com a Legislação Brasileira para cuidado e uso de animais em atividades de ensino ou pesquisa científica. O meio de base utilizado foi o α-MEM suplementado com ITS (insulina 6,25 μg/mL, transferrina 6,25 μg/mL e selênio 6,25 ng/mL), piruvato a 0,23 mM, glutamina a 2 mM, hipoxantina a 2 mM, e 1,25 mg/mL de albumina sérica bovina (BSA), sendo denominado α-MEM+. 5 Fragmentos (3x3x1 mm) do córtex ovariano foram obtidos dos ovários. Dois destes fragmentos foram imediatamente fixados em carnoy e destinados à histologia clássica (controle fresco), enquanto dos demais, um foi cultivado por 7 dias na ausência de extrato da fumaça de cigarro (α-MEM+), e os outros dois foram cultivados presença de extrato da fumaça de cigarro (EFC) em concentrações de 2,5% e 5% (EFC: 2,5% e 5%, respectivamente). Foram realizadas três repetições. O cultivo foi realizado em placas de 24 poços, contendo 1 mL de meio, em uma incubadora a 39ºC e 5% de CO2 em ar. Após a inclusão em blocos de parafina, cortes seriados à espessura de 7μm foram obtidos, montados em lâminas e corados pelo método do ácido periódico de Schiff. Foram realizadas análises morfológicas; análises para determinação do estresse oxidativo; análises da densidade celular do estroma e avaliação da atividade da enzima catalase. Os resultados foram expressos como média ± SEM e submetidos à análise de variância (ANOVA) seguido de teste de Tukey. Os valores foram considerados significativos quando P<0,05. Como resultados foi constatado uma redução significativa no percentual de folículos morfologicamente normais após sete dias de cultivo na presença do extrato da fumaça de cigarro, independente da concentração avaliada, quando comparado ao controle fresco e o controle cultivado. No entanto, não foram observadas diferenças estatísticas na produção de EROs, atividade da catalase e densidade celular do estroma entre os tratamentos avaliados. Na categoria folicular, foi observada uma redução significativa no percentual de folículos morfologicamente normais nos tratamentos com EFC (2,5%: 42,23% ± 9,89; 5%: 37,77% ± 7,99) quando comparado ao controle fresco (92% ± 3,99) e cultivado (85% ± 5,00) (P<0,05). Contudo, os grupos cultivados não apresentaram diferenças significativas entre si. Diante disso, concluímos que o extrato da fumaça de cigarro reduz o percentual de folículos pré-antrais morfologicamente normais após 7 dias de cultivo in vitro. Além disso, evidenciou-se que o estresse oxidativo não parece ser o mecanismo responsável pelas alterações observadas na morfologia folicular.