Comparação dos diluentes Tris-gema e INRA-96 ® na criopreservação de sêmen canino

Abstract

A criopreservação de sêmen tem sido uma técnica amplamente difundida com intuito de favorecer a preservação de material genético de alto valor, difundir o patrimônio genético, visando melhorias no padrão das raças. Além disso, os protocolos usados para a espécie canina podem ser extrapolados para espécies canídeas ameaçadas de extinção. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência do diluente comercial INRA-96® como uma alternativa para a criopreservação do sêmen de cães. O sêmen foi coletado por manipulação digital do bulbo peniano. As amostras foram avaliadas quanto aos seus parâmetros macroscópicos, e quanto a sua cinética espermática por um sistema computadorizado de análise espermática com setup previamente ajustado para cães. Em seguida a morfologia foi realizada, assim como também a viabilidade, integridade de membrana e atividade mitocondrial celular, integridade funcional da membrana plasmática e o potencial ligante dos espermatozoides. Durante o processo de diluição a glicerolização foi realizada, nos tratamentos Tris gema de ovo e ao INRA-96®, a adição ocorreu em ambos, ainda em temperatura ambiente a 37°C. Em seguida as amostras foram refrigeradas a 15°C durante 40 minutos em caixas isotérmicas e posteriormente estabilizadas a 5°C por mais 30 min em incubadora biológica. Neste momento a 5°C, foi realizada a segunda parte da glicerolização nos diluentes Tris-Gema (Controle) e INRA-96®, atingindo-se uma concentração final de 100 × 106 espermatozoides por mL. Após uma semana, as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37°C por 1 minuto. No tocante a descongelação verificou-se que processo provocou uma redução significativa dos parâmetros espermáticos em relação ao sêmen fresco, no entanto, em relação ao parâmetro funcionalidade de membrana apenas o tratamento INRA®-96/37°C (58,0 ± 6,2), diferiu em relação ao TRIS gema/5°C (controle), (70,4 ± 5,9). Em relação aos parâmetros do CASA, apenas os parâmetros VSL, VAP apresentaram diferença estatística (P < 0,05) no tratamento INRA-96®/5°C (36,6 ± 3,8), (38,5 ± 3,8) e (1,2 ± 0,6) em relação ao controle (44,8 ± 2,7); (45,2 ± 3,0); (9,1 ± 3,3), TRIS gema/37°C (28,7 ± 5,5); (30,7 ± 5,6); (3,2 ± 1,0) INRA-96®/37°C (28,7 ± 5,5); (30,7 ± 5,6); (3,2 ± 1,0) respectivamente. Dessa forma, este estudo traz como sugestão o uso do diluente comercial INRA-96® como uma possível alternativa para a criopreservação de sêmen canino, podendo ser adotado o momento de glicerolização 5°C, demonstrando que o efeito protetor do glicerol também é conferido quando acrescidos de 3%, na criopreservação do sêmen canino. No entanto, em vias da atuação do INRA-96® aventa-se a continuidade de estudos de modo a utilizá-lo efetivamente como alternativa para a criopreservação do sêmen do cão.