Prospecção de atividade quitinolítica no trato gastrointerstinal de Erythrolamprus viridis

Abstract

A quitina é um polissacarídeo amplamente encontrado em diferentes organismos presentes em variados habitats. A digestão de quitina por organismos está associada à ação de, pelo menos, duas enzimas específicas, a quitinase responsável por clivar as ligações β(1-4) da quitina em di- e tri-sacarídeos, e a β-N-acetil-D-glicosaminidase. Por conta de sua dieta anurófaga, espécimes da serpente Erythrolamprus viridis acabam ingerindo os restos ricos em material quitinoso em digestão consumidos pela sua presa, o que pode ser desvantajoso aos indivíduos dessa espécie pelo fato de que esse material duro pode causar obstruções e lacerações em seu trato digestivo. Para eliminar o excesso desse material, sabe-se que mecanismos fisiológicos adaptativos tais como a secreção de quitinases no lúmen do trato gástrico já foi estudado em outras espécies de répteis, porém nunca se foi identificada a presença dessas enzimas em qualquer serpente. Para detectar um possível potencial quitinolítico dessa espécie foram feitos extratos celulares do trato gastrointestinal de seis espécimes de E. viridis, através da maceração mecânica após congelamento em nitrogênio líquido seguida de extração proteica. Extratos dos tecidos gastrointestinais do lagarto Tropidurus hispidus foram feitos para servir como controle positivo devido à dieta insetívora dessa espécie. Os extratos foram então avaliados quanto á sua atividade quitinolítica em testes de açúcar redutor através do ensaio com reagente de Schales e quitina coloidal como substrato. Espécimes de E. viridis apresentaram menor potencial quitinolítico comparado a espécimes de T. hispidus. Cálculos da atividade com o teste de Schales demonstraram atividade média de 12,863 U/mL para espécimes de E. viridis, contra uma atividade de 25,17 para extratos de espécimes de T. hispidus. A atividade quitinolítica dos extratos também foi avaliada em substratos de p-nitrofenol com o auxílio de um kit de detecção de atividade quitinásica (Sigma-Aldrich). Esses ensaios também demonstraram uma atividade quitinolítica menor dos extratos de E. viridis comparados aos extratos de T. hispidus (atividade média dos extratos de E. viridis de 2,191 U/mL para substratos mono-, 0,29 U/mL para substratos di- e 0,20 U/mL para substratos tri-, contra as atividades médias dos extratos de T. hispidus de 9,78 U/mL para substratos mono-, 8,58 U/mL para substratos di- e 4,46 U/mL para substratos tri-). Esses resultados indicaram que os extratos de T. hispidus e E. viridis possuem atividade quitinolítica expressiva, sendo essa a primeira vez que foi detectada atividade quitinolítica no trato gastrointestinal de serpentes.